?????? HILIC技術(shù)是用來分離極性或者離子化合物的。與反相模式不用，HILIC模式是使用反相的流動相，但是樣品按照正相的出峰順序。極性分析物會被隔離在填料表面吸附的水層之外或者進(jìn)入水層，并且與填料的硅烷基基團(tuán)進(jìn)行離子交換相互作用。總而言之，這會增強(qiáng)極性化合物的保留，并且增加上樣量。在反相條件下，增加流動相中乙腈的含量，樣品的保留會減弱；而在HILIC模式下，增加流動相中乙腈的含量，樣品的保留會明顯的增強(qiáng)。
????因此，對于極性化合物的洗脫，HILIC模式和反相模式是互補(bǔ)的。富士硅化學(xué)有限公司開發(fā)了兩款HILIC模式的填料，命名為“HLC”硅膠。兩種HLC硅膠都含有兩性的官能團(tuán)，共價(jià)鍵合在硅膠表面。“HLC-A”用于分離純化有機(jī)酸、核酸和糖類；“HLC-P”用于分離氨基酸、多肽。

HLC硅膠

富士硅化學(xué)提供兩款HLC硅膠：“HLC-A”和“HLC-P”。

HLC-P：羧基鏈連接烷基酰胺基（叔酰胺）

HLC-A：2個羧基鏈連接烷基酰胺基（叔酰胺和仲酰胺）

HILIC分離介質(zhì)

在HILIC模式下，初始流動相條件用的是高比例有機(jī)溶劑和水。這種洗脫體系使得單一化合物得到分離，并且之后的處理步驟也相對簡化（旋蒸或者凍干）。洗脫體系中水含量的增加，使得樣品更容易被洗脫出來。因此，在HILIC模式中，與水易混合的有機(jī)相體系最為常用，比如乙腈-水體系。以下應(yīng)用給出了使用HLC-A硅膠，在乙腈-水等度體系中，分析和制備的應(yīng)用。

圖1 HILIC模式下，核酸類物質(zhì)的分離

乙腈、THF和二氧六環(huán)通常溶解在水中作為流動相使用，而不會產(chǎn)生氫鍵相互作用。在高水相的條件下，洗脫時(shí)間變快。雖然反相體系常用于水溶性化合物的分離，但是HLC硅膠更適合用于極性化合物的分離。

圖2 不同流動相條件下樣品的保留

HLC-P硅膠的應(yīng)用

（1）氨基酸的HPLC和TLC分離

（2）多肽的HPLC和TLC分離

（3）制備分離案例

HLC-A硅膠的應(yīng)用

（1）核酸的HPLC和TLC分離

（2）核酸、核苷酸和糖類的HPLC分離

（3）有機(jī)酸的HPLC分離

（4）制備分離案例

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